鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定

• 作者: 韩凯凯 严若峰 刘青涛 刘宇卓 李银 赵冬敏 黄欣梅 杨婧
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 关键词: 鸭坦布苏病毒 甲基转移酶 真核表达
• 年，卷（期）: 2021,（15）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医与水产蚕桑
• 页码范围: 147-150
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65+7
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2021.15.027

摘要

甲基转移酶(methyltransferase,MTase)是鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白5的重要功能基团,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用.为了对鸭坦布苏病毒甲基转移酶进行真核表达,并对其生物学功能进行鉴定,以GenBank中收录的DTMUV JS804株基因序列为模板,设计针对MTase的特异性引物,提取TMUV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板进行扩增,得到MTase的基因片段,然后亚克隆至pCMV-Flag真核表达载体中,构建重组质粒pCMV-Flag-MTase,提取去除内毒素的重组质粒,并转染至BHK-21细胞,通过间接免疫荧光观察和Western Blot鉴定该蛋白的表达.结果显示,质粒pCMV-Flag-MTase经双酶切鉴定证明构建正确,通过间接免疫荧光与Western Blot检测,重组质粒在BHK-21细胞内正常表达,表达的蛋白与天然坦布苏病毒MTase具有相同的反应原性.