红球菌染料脱色过氧化物酶的异源表达及活性分析

• 作者: 皮倩 夏荣 唐蕾
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 5-氨基乙酰丙酸 大肠杆菌 染料脱色过氧化物酶 谷氨酰-tRNA还原酶 红球菌
• 年，卷（期）: 2021,（18）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 86-91
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.026822

摘要

染料脱色过氧化物酶( dye-decolorizing peroxidase,DyP)属于以血红素为辅基的新型过氧化物酶超家族.由于能够降解蒽醌类染料,DyP成为当今绿色经济的研究热点,而染料的有效降解与酶活性密切相关,因此寻求提高酶活性的方法是 DyP后续生产应用的关键所在.克隆来自红球菌( Rhodococcus jostii)的染料脱色过氧化物酶基因 RhDypB,实现在大肠杆菌 Escherichia coli BL21(DE3)中的高效表达,并对提高酶活性的方法进行了研究.利用一步克隆技术构建重组菌株pET24b-DypB /BL21,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalacto-pyranoside,IPTG)诱导使蛋白表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,比较了外源添加血红素合成前体 5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid ,5-ALA)和共表达大肠杆菌血红素合成途径中的谷氨酰-tRNA 还原酶基因( hemA)对酶活性的影响. SDS-PAGE显示在40 kDa有明显的目的条带(纯度达到90% ),蛋白质量浓度可达100 mg/L.添加5-ALA以及共表达 hemA分别使血红素浓度增加至 8. 9 和 2. 4 μmol/ L,相应的酶活性提高了 102%和 93% .RhDypB的可溶性表达与血红素含量的提升,为以血红素作为辅因子的过氧化物酶的相关研究提供依据.