牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法的建立及试剂盒的研制

• 作者: 姜海瀛 张志杰 王艳双 张莉 高丽君 李明成 孙丽媛 张丽华
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: PCR 核酸试纸条 牛肉 快速检测试剂盒 分子克隆 测序
• 年，卷（期）: 2021,（18）
• 所属期刊栏目: 分析与检测
• 页码范围: 275-281
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027563

摘要

该研究建立肉类食品中牛肉 PCR-核酸试纸条快速鉴定方法,并开发快速检测试剂盒.对国家标准中牛的特异性引物进行标记,研发牛肉 DNA 快速提取试剂和基因检测试剂,采用核酸试纸条进行可视化检测;应用分子克隆及测序技术,克隆牛肉标准品;并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察.提取基因组 DNA 的方法简单、快速,DNA 的完整性、浓度及纯度均非常好;退火温度59 ℃、在20 个循环时试纸条检测结果最特异,牛肉正品均出现 2 条条带,易混品及空白对照均出现 1 条条带.克隆测序后的牛肉 DNA 序列与牛线粒体 DNA 特异指纹区段序列同源性 100% .自主研发的试剂盒特异性、重现性、稳定性良好,模板 DNA 最低检出量为 1 pg/μL.该研究建立的 PCR-核酸试纸条方法特异性强、灵敏、准确、简便、快速;研制的试剂盒操作简便快速、结果可视稳定,适用于实地监测.