构建人SMARCAL1基因过表达慢病毒载体调控胚肾细胞增殖

• 作者: 石淑娟 李诚 乔凌燕 杨槟伊 李堂
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 关键词: 慢病毒载体 SMARCAL1 人胚肾细胞HEK293 Wnt通路 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2021,（35）
• 所属期刊栏目: 组织构建细胞学实验|Cytology experiments in tissue construction
• 页码范围: 5682-5687
• 页数: 6页
• 分类号: R446|R496|R318
• 语种: 中文

摘要

背景:研究发现SMARCAL1在人类发育和成熟肾脏的多种细胞类型中选择性表达,表明其在肾脏发育过程中发挥着重要的功能作用.目的:探讨SMARCAL1过表达对于胚肾细胞增殖功能的影响.方法:取293T细胞和HEK293细胞的第3代细胞用于实验.选用pH BLV-CMV-MCS-3FLAG-EF1-ZsGreen-T2A-PURO载体构建人SMARCAL1基因过表达慢病毒载体,转染293T细胞包装慢病毒.实验分为3组:空白组为无处理的HEK293细胞;阴性对照组为转染空载病毒的HEK293细胞;SMARCAL1过表达组为转染SMARCAL1过表达病毒的HEK293细胞.对SMARCAL1过表达慢病毒转染后用嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株.通过观察转染率来检测病毒滴度;荧光定量PCR和Western印迹法验证稳转细胞株;CCK-8和EdU染色法检测细胞增殖情况;进一步通过荧光定量PCR探讨对Wnt通路的影响.结果 与结论:①SMARCAL1过表达质粒基因序列与目的基因一致,经慢病毒包装后测得SMARCAL1过表达慢病毒滴度为1×108TU/mL,空载慢病毒滴度为3x108 TUImL;②与空白组和阴性对照组比较,SMARCAL1过表达慢病毒转染后细胞中SMARCAL1 mRNA和蛋白水平显著升高(P＜0.05),细胞增殖活力明显下降(P＜0.05),Wnt通路中CTNNB1和WNT4基因表达水平降低(P＜0.05);③实验结果表明,SMARCAL1过表达慢病毒载体构建成功并能够在细胞中顺利表达;SMARCAL1基因可能通过Wnt通信号通路参与调节胚肾细胞增殖,进而影响肾脏发育.