间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇诱导多倍体肺癌细胞衰老表型的研究

• 作者: 赵松 王丽丽 欧阳明玥 邢思宁 于卉影
• 来源期刊: 中国临床实用医学
• 关键词: 间充质干细胞条件培养基 线粒体膜电位 DNA损伤应答 炎性细胞因子 多倍体肿瘤细胞
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 多倍体肿瘤巨细胞研究
• 页码范围: 23-30
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn115570-20220208-00254

摘要

目的:探讨间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇(Doc)诱导的多倍体肺癌细胞衰老表型的影响。方法:人非小细胞肺癌1 299细胞株细胞分为3组，常规组、Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组。常规组为二甲基亚砜处理细胞24 h；Doc(24 h)组为100 nmol/L的Doc处理细胞24 h；Doc(24 h)+3 d组为100 nmol/L的Doc处理细胞24 h，更换新鲜的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，继续培养3 d。Doc(24 h)+3 d组细胞分为2组，Doc组和Doc+CM组。Doc组为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养4 d；Doc+CM组为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和hUC-MSC-CM(1∶1)的混合培养基中培养4 d。Hoechst 33342染色观察细胞核形态，流式细胞术分析细胞DNA含量、线粒体膜电位及DNA损伤应答信号分子磷酸化组蛋白H2A.X(γ-H2A.X)的表达，衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性，实时定量聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测衰老相关的炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)与白细胞介素8(IL-8)的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果:Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组细胞核体积增大、DNA含量增加，常规组、Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组多倍体细胞百分比分别为(12.27±3.29)%、(27.13±6.02)%和(43.60±4.26)%，Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组细胞百分比明显高于常规组，差异有统计学意义( F＝33.91， P＝0.001)。常规组、Doc(24 h)组与Doc(24 h)+3 d组细胞密度分别为(8.18±0.54)×10 4/cm 2、(3.78±0.54)×10 4/cm 2及(0.75±0.08)×10 4/cm 2，Doc(24 h)组与Doc(24 h)+3 d组细胞密度显著低于常规组，差异有统计学意义( F＝212.55， P＝0.001)。常规组细胞β-半乳糖苷酶无活性，细胞染色阴性，Doc(24 h)组与Doc(24 h)+3 d组中观察到有呈蓝色的阳性染色细胞，β-半乳糖苷酶活性增强。流式细胞术分析线粒体膜电位，常规组、Doc组与Doc+CM组的JC-1单体百分比分别为(1.7±1.2)%、(48.2±12.9)%及(46.6±12.0)%，Doc组与Doc+CM组低电势细胞百分比明显高于常规组，差异有统计学意义( F＝20.15， P＝0.002)，Doc组细胞与Doc+CM组细胞线粒体膜电位比较，差异无统计学意义( F＝20.15， P＝0.854)。常规组、Doc组与Doc+CM组中γ-H2A.X表达阳性的细胞百分比分别为(54.9±3.2)%、(58.9±4.0)%及(60.6±5.4)%，差异无统计学意义( F＝1.40， P＝0.317)。Doc组与Doc+CM组γ-H2A.X荧光信号强度明显高于常规组，荧光信号右移，Doc组与Doc+CM组γ-H2A.X荧光信号强度没有差异，荧光信号没有偏移。Doc组IL-6与IL-8的mRNA表达水平是常规组的(7.22±0.34)倍及(157.64±7.49)倍，差异有统计学意义( t＝1.00， P＝0.001)。Doc+CM组IL-6与IL-8的mRNA表达水平是Doc组的(48±6)%及(43±3)%，差异有统计学意义( t＝1.00， P＝0.001)。 结论:Doc诱导人非小细胞肺癌1 299细胞株细胞产生多倍体肿瘤细胞，即多倍体肺癌细胞，多倍体肺癌细胞表现多种衰老表型特征，hUC-MSC-CM不改变Doc诱导的多倍体肺癌细胞衰老表型，但显著降低了炎性因子IL-6和IL-8的mRNA表达水平。