塞内卡病毒A SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 王晨 罗愿 陈彦希 周远成 刘骁
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 塞内卡病毒A 荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 162-167
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0013

摘要

为深入研究塞内卡病毒A的病原学及流行病学,本研究分离获得了 1株塞内卡病毒A的重庆地区毒株并将其命名为SVA-XN2021.针对VP1基因,设计了 1对特异性引物,将SVA-XN2021株编码区克隆入载体pcDNA3.1(+),构建了以重组标准阳性质粒pcDNA3.1(+)-SVA为模板的SVA的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验.结果显示,本研究建立的荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品模板在1.0×101～1.0×106 copies/μL的范围内线性关系良好,相关系数为0.994 8.且用该方法对PEDV、TGEV、PDCoV等猪常见的腹泻病样品检测时无扩增,表明其特异性良好;该方法检测下限可达到1.0×101copies/μL,比常规RT-PCR敏感性高10倍;组内变异系数介于0.1％～0.29％之间,组间变异系数介于0.1％～0.81％之间,说明该检测方法重复性较好.上述结果表明,本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法可以作为SVA的重要诊断技术,有利于SVA的防治.