茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因的克隆、表达及功能分析

• 作者: 王云生 许玉娇 胡晓婧 蒋晓岚 杨琴 李伟伟 刘亚军 高丽萍 夏涛
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 二氢黄酮醇4-还原酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 页码范围: 193-201
• 页数: 8页
• 分类号: S571.1,Q946.5
• 语种: 中文

摘要

茶树二氢黄酮醇4-还原酶（dihydroflavonol 4-reductase, DFR）是儿茶素合成途径中的关键酶。本研究采用RT-PCR技术，获得了茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因（CsDFR）的开放阅读框，它编码含347个氨基酸的蛋白质，推测分子量为38.69kD，等电点为6.02。成功地将该基因重组到表达载体SUMO上，并在大肠杆菌BL21中进行原核表达；优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度；纯化出目的蛋白。利用HPLC-MS方法对重组蛋白进行了体外酶活检测，结果表明目的蛋白具有DFR酶活性，可催化DHQ和DHM的还原反应。