RNA内切酶CPSF3受E3D泛素连接酶UBE3D调控

• 作者: 鲁月 罗婧 颜璐 吴宇 郑煜芳
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素化 E3D泛素连接酶 切割与聚腺苷酸化特异因子3 酵母双杂交 免疫共沉淀
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 页码范围: 43-51
• 页数: 9页
• 分类号: Q81
• 语种: 中文

摘要

泛素化是泛素分子在系列特殊酶作用下,对靶蛋白进行特异性修饰的过程,该过程参与细胞周期、基因表达、信号传递等几乎一切生命活动的调控,近年来成为开发新药物的新靶点.泛素化研究中,确定E3泛素连接酶和其特异性底物之间的作用是研究的重点和难点,探索底物蛋白翻译后修饰命运,对于研究E3泛素酶的修饰类型具有指示性的作用.E3D泛素连接酶基因(UBE3D)在人和小鼠中相对保守,小鼠中UBE3D纯合敲除致死,提示UBE3D在胚胎发育过程中具有重要作用.本文选用了酵母双杂交(Y2H)、亲和纯化质谱(AP-MS)及免疫共沉淀(Co-IP)3种方法,筛选出了UBE3D的候选底物切割与聚腺苷酸化因子3(CPSF3).研究中发现,过表达UBE3D可以显著上调CPSF3的蛋白表达水平,敲低UBE3D可以显著下调CPSF3蛋白的表达水平,揭示UBE3D具有稳定CPSF3的作用.细胞外源泛素化实验表明,过表达UBE3D不会改变CPSF3的蛋白泛素化水平,提示UBE3D对CPSF3的泛素化修饰可能不同于常规E3泛素连接酶.CPSF3是一种核酸内切酶,对于mRNA的成熟和基因表达至关重要.因此,UBE3D可能通过稳定CPSF3对胚胎发育起到重要作用.