灰盖拟鬼伞核定位蛋白重组表达系统的构建

• 作者: 王宇 赵静 田宣 金盛宇 冉妍妍 黄小娟 袁静 袁生 刘中华
• 来源期刊: 菌物学报
• 关键词: 核定位序列 重组表达 启动子 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Research papers
• 页码范围: 68-77
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13346/j.mycosystema.210189

摘要

为构建灰盖拟鬼伞Coprinopsis cinerea的核定位蛋白重组表达系统,本研究通过蛋白序列比对和信息学分析,预测了灰盖拟鬼伞组蛋白H2B的核定位序列,构建了融合组蛋白H2B核定位序列的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组表达载体,将该载体转入灰盖拟鬼伞AmutBmut菌株,检测组蛋白H2B核定位序列是否可以引导GFP定位在细胞核区域.研究结果显示,在灰盖拟鬼伞β-微管蛋白启动子的驱动下,经过密码子优化的GFP基因可以在鬼伞体内表达、产生绿色荧光.同时来自灰盖拟鬼伞组蛋白H2Bb (CC1G_07639)的核定位序列,可以成功地引导GFP入核.本研究成功地构建了灰盖拟鬼伞核定位蛋白重组表达系统,为后续优化灰盖拟鬼伞的CRISPR/Cas9基因编辑系统、深入研究灰盖拟鬼伞的子实体发育机制奠定了基础.