牛黄−麝香联合应用通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制肝癌细胞增殖并诱导其凋亡

• 作者: 宁迪敏 邓哲 吴泳蓉 梅巳 滕永杰 周青 田雪飞
• 来源期刊: 数字中医药（英文版）
• 关键词: 牛黄 麝香 肝癌细胞 PI3K/AKT/mTOR信号通路 Caspase-3 Caspase-9 Bcl-2 Bax 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 页码范围: 83-92
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.1016/j.dcmed.2022.03.009

摘要

目的 探讨牛黄?麝香联合使用对人肝癌细胞SMMC-7721及裸鼠肝癌皮下移植瘤的影响,探讨其抗肝癌机制.方法 将牛黄?麝香联合应用于体内、体外两种肝癌模型.体外培养人肝癌SMMC-7721细胞系,实验分为牛黄?麝香处理组和对照组,采用不同浓度(生药量0.625、1.25、2.5、5 mg/mL)牛黄?麝香萃取液进行干预,细胞增殖及毒性检测(CCK-8)实验检测肝癌细胞增殖能力,伤口愈合实验检测肝癌细胞迁移能力.制备人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,选择18只5周龄SPF级雄性BALB/c裸鼠随机分为模型组(0.9％ 生理盐水0.2 mL/d),牛黄?麝香组[牛黄45.5 mg/(kg·d)+麝香13 mg/(kg·d)]与顺铂组(DDP,每周腹腔注射一次5 mg/kg),每组6只,各组裸鼠均给药14天.观察裸鼠皮下移植瘤瘤体体积及质量变化,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝癌裸鼠皮下移植瘤模型中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路、凋亡相关因子p70 S6 Kinase(S6K)、Bax、Bcl-2、cas-pase-3和caspase-9的表达.原位末端转移酶标记技术(TUNEL)用于凋亡细胞的定量分析.结果 CCK-8实验表明,牛黄?麝香联合使用抑制肝癌细胞增殖能力优于使用单味药,且作用效果呈浓度?时间依赖性(P<?0.01).伤口愈合实验表明,牛黄?麝香联合使用对肝癌细胞迁移能力有明显的抑制作用(P<?0.01).肝癌裸鼠皮下移植瘤模型实验发现,牛黄?麝香组瘤体体积及质量均低于模型组(P<?0.01),牛黄?麝香组与DDP组PI3K/AKT/mTOR信号通路及S6K蛋白表达水平均明显下降(P<?0.01),牛黄?麝香组抑凋亡基因Bcl-2的表达下调(P<?0.05),促凋亡基因Bax及凋亡相关因子caspase-3和caspase-9的表达显著上调(P<?0.01).TUN-EL实验也进一步证实,二者联用能够促进肝癌细胞凋亡(P<?0.01).结论 牛黄?麝香联合使用能抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖及迁移,并有效抑制肝癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与下调PI3K/AKT/mT-OR通路、调控凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的表达及促进细胞凋亡密切相关.