基于VN210/VC210的双分子荧光互补定量分析cofilin-actin相互作用的特异性

• 作者: 王小毅 马晓骊 陈虹 黄秉仁 陈等
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 双分子荧光互补 定量分析 cofilin-actin相互作用
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究|BASIC RESEARCH
• 页码范围: 601-605
• 页数: 5页
• 分类号: R-33|Q75|Q591
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2022.04.001

摘要

目的:利用双分子荧光互补技术定量分析cofilin-actin的特异性相互作用.方法:首先构建表达VN210(编码荧光蛋白Venus 1-210氨基酸)和VC210(编码荧光蛋白Venus 210-238氨基酸)探针的质粒,通过梯度剂量转染检测该探针对的自组装能力;其次构建VN210/VC210与bJun、bFos、Fos△zip、cofilin(WT)、cofilin(S3E)和actin的融合表达载体,在HeLa细胞中分别过表达不同载体组合,以VN210-bJun/bFos-VC210组作为阳性对照,以VN210-bJun/bFos△zip-VC210组作为阴性对照,使用多功能细胞观测显微镜观察并拍摄荧光图像;最后使用多功能微孔板检测仪,对对照组进行波谱扫描,确定最适合检测的激发光波长和发射光波长,再以此选择波长检测实验组中可观察到荧光信号组合的荧光强度,进行统计分析.结果:(1)VN210/VC210在各转染剂量组中均未观察到荧光信号;(2)阳性对照组可观察到荧光信号,阴性对照组未观察到荧光信号;实验组中,VN210-cofilin(WT)/actin-VC210组荧光信号较强,VN210-cofilin(S3E)/actin-VC210和VN210/actin-VC210组荧光信号较弱,其余组均观察不到荧光信号;(3)产生荧光信号的实验组中,VN210-cofilin(S3E)/actin-VC210和VN210/actin-VC210组间的荧光信号无显著差异,但分别与VN210-cofilin(WT)/actin-VC210组具有显著差异.结论:VN210/VC210双分子荧光互补技术可定量检测cofilin-actin的特异性相互作用.