PAK6影响裸鼠乳腺癌早期放疗疗效的实验研究

• 作者: 高玉伟 赵丽娟 姜沁延
• 来源期刊: 华南国防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: p21活化激酶6 乳腺癌 放疗敏感性 裸鼠 Wnt/β-catenin
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 7-15
• 页数: 9页
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13730/j.issn.1009-2595.2022.01.002

摘要

目的 探究分析p21活化激酶6(p21-activated kinases 6,PAK6)基因对裸鼠乳腺癌早期放疗疗效的影响及作用机制.方法 采用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(reabtime reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)实验和Western blot实验检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及人乳腺癌细胞MDA-MB-468、MCF-7中PAK6 mRNA水平及蛋白表达.采用慢病毒载体介导RNA技术(RNAi),构建PAK6基因稳定沉默的人乳腺癌细胞系MDA-MB-468/shRNA-PAK6、MCF-7/shRNA-PAK6并检测转染效率,分别给予0、2、4 Gy单次剂量放射治疗,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)实验、克隆形成实验和流式细胞凋亡实验观察沉默PAK6表达对乳腺癌细胞放射敏感性的影响.构建裸鼠皮下乳腺癌移植瘤模型,分别给予0、2、4 Gy单次剂量放射治疗,观察移植瘤生长情况,计算抑瘤率.采用RT-qPCR实验和Western blot实验检测移植瘤组织中PAK6蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达情况.结果 与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A比较,人乳腺癌细胞MDA-MB-468和MCF-7中PAK6 mRNA及蛋白均呈明显高表达(P＜0.05).在乳腺癌细胞MDA-MB-468和MCF-7中,沉默PAK6表达可抑制细胞活力和细胞克隆形成率(P＜0.05),增加细胞凋亡率(P＜0.05).裸鼠成瘤实验结果显示,与2 Gy shRNA-NC组比较,2 Gy shRNA-PAK6组大鼠移植瘤体积明显降低(P＜0.05),肿瘤倍增时间和增敏系数明显增大(P＜0.05),抑瘤率增加(P＜0.05),移植瘤组织中PAK6、β-catenin、c-myc蛋白表达水平明显较低(P＜0.05),Caspase-3蛋白表达水平则明显较高(P＜0.05);与4Gy shRNA-NC组比较,4Gy shRNA-PAK6组各项指标趋势同前.结论 沉默乳腺癌细胞中PAK6基因表达可抑制肿瘤细胞的增殖和克隆,改善肿瘤细胞体内外放疗敏感性,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路作用有关.