高糖对体外培养视网膜Müller细胞自噬及凋亡的影响

• 作者: 王立 颜世传 牛兰俊 朱曼辉 孙晓东 徐迅 宋鄂
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 关键词: 糖尿病视网膜病变 高糖 自噬 凋亡 Müller细胞
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-26
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn115909-20210408-00143

摘要

目的：:探究高糖诱导体外培养的视网膜Müller细胞自噬及凋亡的变化。方法：:实验研究。将体外培养的SD大鼠视网膜Müller细胞根据不同糖浓度分为5.5 mmol/L葡萄糖组（正常组）及20、30、40、50 mmol/L高糖组，并对40 mmol/L高糖处理Müller细胞组采用不同时间3、6、12、24、36 h进行培养。使用蛋白免疫印迹法及细胞免疫荧光检测自噬指标LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、自噬信号通路P62、Beclin-1蛋白表达及细胞定位；使用透射电镜及GFP-LC3慢病毒转染观察自噬小体的形成情况；使用TUNEL实验检测细胞凋亡状态。不同组别间数据比较采用单因素方差分析。结果：:正常组及20、30、40、50 mmol/L高糖组中Müller细胞质的Beclin-1、P62及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白相对表达量总体比较，差异均有统计学意义（ F=131.21， P=0.029； F=197.25， P=0.012； F=100.02， P=0.045），其中与正常组比较各浓度高糖组Müller细胞质内Beclin-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白均明显降低（ P<0.05），P62蛋白相对表达量明显增加（ P<0.001）。正常组以及6、12、24、36 h高糖组中Müller细胞质的Beclin-1、P62及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白相对表达量总体比较，差异均有统计学意义（ F=98.46， P=0.015； F=109.48， P=0.004； F=99.27， P=0.032），其中6 h高糖组LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白明显增加（ P=0.002、0.015），12、24、36 h高糖组与正常组相比较LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白均明显下降（ P<0.05），P62蛋白明显增加（ P<0.001）。正常组及6、24 h高糖组视网膜Müller细胞中GFP-LC3转染阳性颗粒、自噬小体相对数量组间总体差异有统计学意义（ F=240.49， P=0.014； F=198.98， P=0.001），其中与正常组比较，6 h高糖组GFP-LC3转染阳性颗粒、自噬小体相对数量增加（ P=0.002、0.029），24 h高糖组明显降低（ P=0.019、0.036）。正常组及6、24 h高糖组及3MA组视网膜Müller细胞凋亡指数分别为3.14±1.01、15.34±3.87、25.82±4.96、24.79±4.01，总体比较差异有统计学意义（ F=234.12， P=0.003），与正常组比较，6、24 h高糖组TUNEL阳性细胞增多（ P=0.022、0.039），24 h高糖组与6 h高糖组比较TUNEL阳性细胞进一步增加（ P=0.017）。 结论：:高糖诱导体外培养的视网膜Müller细胞早期自噬增加，细胞凋亡抑制，随着时间不断延长，高糖抑制自噬形成，增加细胞凋亡。高糖抑制自噬可能是促进Müller细胞凋亡的重要原因。