环孢素A在反相液相色谱中的吸附行为及分离纯化

• 作者: 李志东 傅青 戴卓舜 金郁 梁鑫淼
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 反相液相色谱 制备高效液相色谱 环孢素A 吸附等温线 纯化
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Articles
• 页码范围: 66-73
• 页数: 8页
• 分类号: O658
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2021.01045

摘要

环孢素A(cyclosporine A,CsA)是由11个氨基酸组成的中性环状多肽,是临床拮抗器官和组织移植后排异反应的首选药物.高效液相色谱法广泛应用于CsA的分离分析,开展CsA色谱行为的研究是使用制备高效液相色谱纯化CsA的关键.该文首先在C18固定相上比较了CsA在甲醇-水和乙腈-水两种流动相体系中的保留行为,结果表明其保留时间对有机相比例变化比较敏感.控制甲醇比例在84％～88％,或者乙腈比例在75％～85％,CsA的保留因子(七)在3～7范围内.考察了上样量对CsA峰形的影响.随着上样量增加,在两种流动相体系中,CsA的峰形都由对称开始变得拖尾,保留时间前移.因此在进行CsA纯化时,需要特别注意前杂的去除情况.然后采用吸附等温线描述CsA的保留行为,当流动相中CsA的质量浓度较低时,有机相比例对溶质在固定相上的吸附量影响并不明显.随着溶质的质量浓度增加至0.5 g/L以上,有机相比例降低有助于提高CsA在固定相上的吸附量.和甲醇-水体系相比,在乙腈-水体系中固定相对溶质有更大的吸附容量.用模型对CsA的等温吸附曲线拟合,在甲醇-水体系中符合Langmuir模型,在乙腈-水体系中为Moreau模型.由模型参数可知在两种体系下,CsA在C18固定相上均为单层吸附,区别在于乙腈-水体系中CsA会产生较大的分子间作用力.最后,实验采用0～ 60 min 65％ ～ 75％乙腈、60～80 min 75％乙腈的条件开展了环孢素A纯化的探索实验,可将CsA的杂质控制在0.2％以下.本研究结果对采用制备高效液相色谱纯化CsA具有指导意义.