茉莉花JsMYB305转录因子的原核表达及蛋白纯化

• 作者: 万超 张月 胡莉 伍炳华 袁媛
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 茉莉花 MYB转录因子 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 园艺科学|Horticultural Science
• 页码范围: 164-169
• 页数: 6页
• 分类号: S685.16
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2022.002.005

摘要

[目的]获得茉莉花香气调控转录因子JsMYB305的重组蛋白,为深入研究JsMYB305调控茉莉萜类香气代谢的分子机理及筛选其他互作蛋白提供基础.[方法]通过酶切连接的方式,将JsMYB305的编码序列构建到原核表达载体pGEX-4T-1,转化BL21(DE3)表达菌株,通过IPTG诱导蛋白表达、GST亲和树脂分离纯化,最后Western Blot鉴定重组蛋白.[结果]重组蛋白的诱导条件为0.2 mmol·L?1 IPTG,最适宜纯化的温度和时间为28℃诱导4 h,经20 mmol·L?1 GSH洗脱的蛋白纯度较好,Western Blot结果表明重组蛋白的大小正确.[结论]成功获得了JsMYB305重组蛋白,为后期利用GST-pull down技术筛选互作蛋白及EMSA研究JsMYB305对特定启动子位点的结合提供基础.