恒温隔绝式聚合酶链式反应检测食品中金黄色葡萄球菌

• 作者: 李传友 曾宝锋 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 朱成林 曾英杰 于基成 唐俊妮
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 恒温隔绝式聚合酶链式反应 金黄色葡萄球菌 DNA提取 nuc基因 快速检测
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 安全检测|Safety Detection
• 页码范围: 339-345
• 页数: 7页
• 分类号: TS251.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20201028-287

摘要

建立一种恒温隔绝式聚合酶链式反应(insulated isothermal polymerase chain reaction,iiPCR)检测食品中金黄色葡萄球菌的方法.根据nuc基因设计特异性引物、探针,并探索针对食品样品快速提取金黄色葡萄球菌模板DNA的方法;通过优化引物、探针及模板的用量,对iiPCR的特异性、灵敏度、稳定性进行评价,并利用该方法和传统PCR方法对人工污染样品和实际采集食品样品中的金黄色葡萄球菌进行检测和比较.结果 表明:水浴法因操作简便、耗时短、仪器要求不高,适合快速提取模板DNA;建立的iiPCR具有特异性强、灵敏度高、稳定性好的特点,且与其他菌无交叉反应;对人工污染猪肉样品和牛奶样品中的金黄色葡萄球菌,iiPCR方法可在培养至第6小时完成检测,检出限为103 CFU/mL和102 CFU/mL,传统PCR方法8h后完成检测,检出限为105 CFU/mL;针对实际采集的食物样品,验证实验表明iiPCR方法在培养至第6小时的检出结果与传统PCR在培养至第12小时以及传统培养方法培养至第16小时的检出结果一致.证明建立的iiPCR方法能够更快速准确检测食品中金黄色葡萄球菌.