双表达系统制备新型冠状病毒N基因装甲RNA颗粒的研究

• 作者: 高志强 汪琳 朱忠武 任彤 蒲静 赵相鹏 尹羿 张伟
• 来源期刊: 中国口岸科学技术
• 关键词: 双表达系统 新型冠状病毒 N基因 装甲RNA颗粒
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 卫生检疫|Health Quarantine
• 页码范围: 73-80
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-4689.2022.02.013

摘要

人工合成新型冠状病毒(SARS-CoV-2)标准参考毒株Wuhan/WIV04/2019完整N基因序列(1260 bp)和包含MS2噬菌体基因组成熟酶蛋白、衣壳蛋白基因序列(1682 bp),分别克隆到原核双表达质粒pACYCDuet-1的2个不同的多克隆位点,从而获得重组表达质粒pACYC-MS2-CoV2 N.将pACYC-MS2-CoV2 N转化表达菌株BL21(DE3),经表达、纯化,获得含有SARS-CoV-2完整N基因的装甲RNA颗粒.经鉴定装甲RNA颗粒含有SARS-CoV-2完整N基因且没有DNA残留,并可抵抗RNase消化.采用荧光RT-PCR对装甲RNA颗粒进行定值后,制备出了用于SARS-CoV-2 N基因检测的核酸质控品,该核酸质控品均匀、稳定、可重复性好,在2～8℃可保存180d,可用于SARS-CoV-2核酸检测的质控.