解脲脲原体GrpE蛋白促进小鼠树突状细胞成熟并诱导Th1型免疫应答

• 作者: 郭方毅 唐艳红 袁红霞 张文君 向璟 刘鹏琴 滕文友 李冉辉 代国知
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 解脲脲原体 GrpE 树突状细胞 免疫应答
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 41-49
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112309-20210525-00175

摘要

目的:探讨解脲脲原体GrpE蛋白( Ureaplasma urealyticum GrpE， Uu-GrpE)对树突状细胞成熟的影响及其对T细胞极化的作用。 方法:表达纯化 Uu-GrpE蛋白并利用Western blot鉴定。分离培养小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells，BMDCs)，利用LDH试剂盒分析 Uu-GrpE的细胞毒性，流式细胞术检测 Uu-GrpE对BMDCs表面共刺激分子CD80和CD86以及主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(major histocompatibility complex Ⅱ，MHCⅡ)表达的影响，ELISA检测其刺激BMDCs后IL-12p70、TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子的表达；磁珠分选同系异体小鼠的脾脏中初始CD4 +T细胞(CD4 +Na?ve T细胞)，通过构建BMDCs与Na?ve T细胞共培养体系分析 Uu-GrpE刺激成熟的BMDCs(GrpE-BMDCs)对Na?ve T细胞增殖及极化的影响。GrpE-BMDCs经尾静脉注射免疫小鼠并利用ELISA和流式细胞术观察其所诱导的特异性体液和细胞免疫应答。 结果:成功表达 Uu-GrpE并分离出高纯度BMDCs， Uu-GrpE可刺激BMDCs分泌IL-12p70、TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子且无细胞毒性；同时 Uu-GrpE可显著增加BMDCs表面分子CD80[平均荧光强度(mean flourscence indensity，MFI)：(324.00±22.11) vs (91.03±10.95)， P<0.01]、CD86[MFI：(1 176.00±51.39) vs (217.00±14.93)， P<0.01]和MHCⅡ[MFI：(708.70±56.32) vs (185.70±16.77)， P<0.01]的表达；与单独GrpE-BMDCs组和GrpE(热变性)-BMDCs+T细胞组比较，GrpE-BMDCs不仅可刺激Na?ve T细胞增殖[刺激指数(stimulation index)：(7.25±0.21), (6.55±0.23), (6.09±0.35)， P均<0.05]，并且还诱导Na?ve T细胞分泌Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ [IL-2：(145.60±14.67) pg/ml，(55.92±3.12) pg/ml，(26.05±2.40) pg/ml， P<0.05和 P<0.01；IFN-γ：(267.20±37.80) pg/ml, (146.70±20.65) pg/ml，(27.84±6.69) pg/ml， P均<0.05]，而Th2型细胞因子IL-4、IL-10和IL-5则无明显改变。与PBS组和PBS+BMDCs组比较，GrpE-BMDCs经过继转移后，可诱导机体产生Th1型免疫应答。 结论:Uu-GrpE蛋白明显促进BMDCs成熟及活化，且进一步证明其作为解脲脲原体候选蛋白疫苗可诱导Th1型免疫应答。