葛根素单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法建立

• 作者: 魏文斌 岳世彦 周荣荣 南铁贵 陈敏 袁媛
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 葛根素 单克隆抗体 中药 酶联免疫分析法
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 资源与鉴定
• 页码范围: 48-53
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20211025.101

摘要

采用过碘酸盐氧化法,将葛根素半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,得到免疫抗原葛根素-BSA和包被抗原葛根素-OVA.葛根素-BSA常规免疫程序免疫BALB/c小鼠,3次免疫后检测小鼠血清的效价和特异性.加强免疫后取小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,采用单克隆抗体筛选技术,筛选得到抗葛根素单克隆抗体杂交瘤细胞株24株.制备腹水并纯化后,其中抗葛根素单克隆抗体M1与4'-甲氧基葛根素、大豆苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷元、葛根素芹菜糖苷、3'-甲氧基葛根素和3'-羟基葛根素的交叉反应率分别为239.84％、112.18％、67.89％、58.28％、22.37％、0.40％、0.20％,与黄芩素和黄芩苷等其他化合物的交叉反应率均＜0.10％.基于抗葛根素单克隆抗体的间接竞争酶联免疫分析方法(icELISA)的IC50为44.80 ng·mL-1,检测范围为8.20～292.30 ng·mL-1,加样回收率为91.95％～98.20％,变异系数为0.70％～2.60％.利用所建立的icELISA测定了6批葛根类药材中葛根素的含量,并用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS)进行验证,两方法的相关性为0.9990,表明所建立的icELISA可以用于葛根和粉葛中葛根素含量的快速检测.