林麝干扰素α基因克隆、表达及转录调控分析

• 作者: 杨威 伍茜 程建国 罗燕 王印 杨泽晓 姚学萍
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 林麝 干扰素 毕赤酵母 转录调控
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 194-204
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-0177

摘要

干扰素在病毒性疾病的防治上,具有很高的临床应用前景.为了林麝干扰素的研究与应用,使用同源克隆方法首次克隆得到9条林麝干扰素α基因序列,序列全长均为570 bp,编码189个氨基酸,前23个氨基酸为信号肽,具有4个保守的半胱氨酸残基和5个保守的脯氨酸残基.9种亚型之间,核酸序列同源性为97.0％-99.6％,氨基酸序列同源性为93.7％-99.5％.蛋白结构主要由5个α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构与牛和人干扰素α高度相似.结构域预测包含干扰素受体IFNAR结合位点.首次构建了林麝干扰素α表达质粒并成功使用毕赤酵母表达出林麝干扰素α,确定了1％的最佳甲醇诱导浓度与96 h的最佳诱导时间.使用qPCR首次确定了林麝干扰素α对林麝肺成纤维细胞FMD-C1干扰素刺激基因具有转录调控作用,并具有剂量依赖性,调控作用在6 h达到最强.CCK-8法确定了林麝干扰素α可以抑制FMD-C1细胞的增殖,抗增殖作用也具有剂量依赖性.以上结果为林麝干扰素α的抗病毒研究与临床应用提供了理论基础.