基于微滴式数字PCR技术对乙型肝炎低病毒血症患者血浆HBV DNA精准检测

• 作者: 范子豪 田原 徐玲 曹亚玲 陈思思 潘桢桢 张向颖 段钟平 任锋
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微滴式数字PCR 乙型肝炎病毒 低病毒血症 HBV DNA 精准检测
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 87-91
• 页数: 5页
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2022.02.02

摘要

目的 建立基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测HBV DNA的方法,并实现对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA的精准检测.方法 构建pUC57-HBV质粒作为阳性对照质粒,设计合成HBV DNA ddPCR引物及探针,以梯度稀释的阳性对照质粒为模板进行ddPCR检测,完成标准曲线构建和检出限分析,并进行检测的重复性和特异性分析.收集首都医科大学附属北京佑安医院19例乙型肝炎低病毒血症患者的血浆样本(HBV DNA<10 IU/mL),提取HBV DNA后进行ddPCR检测.结果 建立的基于ddPCR技术检测HBV DNA的方法检测下限低至1 copy/μL(阳性质粒稀释法);对3种不同拷贝的阳性对照质粒(1×102、1×101、1×100 copies/μL)重复检测的变异系数分别为18.8％、9.9％、9.7％,且具有100％特异性;应用该方法在低于临床检测下限的乙型肝炎低病毒血症患者中,以1 copy/μL为临界值,HBV DNA的阳性检出率为68.42％.结论 建立的ddPCR检测低病毒载量HBV DNA检测方法能够高灵敏和高特异地对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA实现绝对定量.