高纯度纤溶酶-α2-纤溶酶抑制剂和凝血酶-抗凝血酶复合物的制备

• 作者: 周帅辉 王伟杰 余正 任和 李帅鹏 杨艳坤 白仲虎
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 凝血酶 抗凝血酶 纤溶酶-α2-纤溶酶抑制剂 亲和层析 纯化
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法|TECHNIQUES AND METHODS
• 页码范围: 110-114
• 页数: 5页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2022.01.110

摘要

为获得纤溶酶-α2-纤溶酶抑制剂(plasmin-α2-plasmin inhibitor complex,PIC)与凝血酶-抗凝血酶(thrombin-antithrombin,TAT)单克隆抗体及建立相应复合物的检测方法,需要制备高纯度的PIC与TAT复合物.以脂血血浆为研究材料,进行血浆前处理,通过尿激酶激活血浆,经Lysine-sepharose亲和层柱,最后获得高纯度的PIC;处理过的血浆经过氯化钡吸附、饱和硫酸铵沉淀后,获得抗凝血酶(antithrombin,AT)与凝血酶原(prothrombin,Pro-T);采用Ecarin蛇毒激活Pro-T获得T,将T与AT分别通过Heparin-sepharose亲和柱以提高其纯度,使其在体外混合反应得到TAT混合物,再经Heparin-sepharose亲和柱除去未反应的T与AT,最终获得高纯度TAT.通过SDS-PAGE、紫外分光光度法与HISCL自动分析仪对产物进行鉴定与定量.结果表明:PIC最佳激活条件为2 mg尿激酶/100 mL血浆,37℃激活30 min,最终获得2.5 mg PIC,经SDS-PAGE鉴定纯度在90％以上;Pro-T的激活条件为0.5 mL蛇毒/100 mL血浆,37℃激活20 min,从100 mL血浆中获得2.1 mg T与6.2 mg AT;T与AT体外最佳反应质量比例为0.7:1,经SDS-PAGE鉴定TAT的纯度在80％以上.