阿魏酸钠对人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的调控作用及其信号机制

• 作者: 王畅 陈炜 王宝家
• 来源期刊: 中华烧伤与创面修复杂志
• 关键词: 瘢痕 成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 阿魏酸钠 转化生长因子β/Smad信号通路
• 年，卷（期）: 2022,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 471-480
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20201120-00484

摘要

目的:探讨阿魏酸钠对人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）增殖、凋亡的调控作用和信号机制。方法:采用实验研究方法。取第4~6代人皮肤HSFb用于后续实验。将HSFb分别与终质量浓度1、1×10 -1、1×10 -2、1×10 -3、1×10 -4、1×10 -5、1×10 -6 mg/mL阿魏酸钠共培养48 h，采用噻唑蓝法测定细胞吸光度值并采用线性回归法分析阿魏酸钠的半数致死浓度（LC50），样本数为6。将HSFb分别与终质量浓度0.1、0.2、0.3、0.4 mg/mL的阿魏酸钠共培养24、48、72、96 h后，采用噻唑蓝法测定细胞吸光度值并计算细胞增殖抑制率（样本数为3）。取细胞，按随机数字表法分为采用相应终质量浓度阿魏酸钠处理的0.300 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.003 mg/mL阿魏酸钠组和不进行任何处理的阴性对照组。培养72 h后，采用噻唑蓝法测定细胞吸光度值（样本数为5），采用透射电子显微镜观察细胞微观形态（样本数为3），采用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡情况并计算凋亡指数（样本数为4），采用免疫组织化学法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达（样本数为4），采用蛋白质印迹法检测转化生长因子β 1（TGF-β 1）、磷酸化Smad2/3、磷酸化Smad4、磷酸化Smad7的蛋白表达（样本数为4）。对数据行单因素方差分析、Dunnett检验。 结果:阿魏酸钠的LC50为0.307 5 mg/mL。培养24~96 h，4个质量浓度阿魏酸钠处理的细胞增殖抑制率均呈先升高后降低的趋势，于培养72 h达到最高，选择72 h作为后续实验的处理时间。培养72 h后，0.003 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞吸光度值分别为0.57±0.06、0.53±0.04、0.45±0.05，均明显低于阴性对照组的0.69±0.06（ P<0. 01）。培养72 h后，与阴性对照组比较，用阿魏酸钠处理的3组细胞出现不同程度的核固缩或断裂、裂解，染色质丢失，胞质中可见线粒体肿胀、粗面内质网扩张，局部逐渐空泡化。培养72 h后，与阴性对照组比较，0.003 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞凋亡指数均显著升高（ P<0. 05或 P<0. 01）。培养72 h后，与阴性对照组比较，0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞Bcl-2蛋白表达量明显减少（ P<0. 01），0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞Bax蛋白表达量均明显增加（ P<0. 05），0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞caspase-3蛋白表达量显著增加（ P<0.01）。培养72 h后，与阴性对照组比较，0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞TGF-β 1、磷酸化Smad2/3、磷酸化Smad4蛋白表达量均明显减少（ P<0. 05或 P<0. 01），0.003 mg/mL阿魏酸钠组、0.030 mg/mL阿魏酸钠组、0.300 mg/mL阿魏酸钠组细胞磷酸化Smad7蛋白表达量均显著增加（ P<0.01）。 结论:阿魏酸钠可通过阻断TGF-β/Smad信号通路上的关键蛋白的表达，协同激活线粒体凋亡途径共同发挥抑制人皮肤HSFb增殖和促进人皮肤HSFb凋亡的作用。