重楼皂苷Ⅰ靶向EGFR影响人乳腺癌细胞增殖及凋亡的作用机制

• 作者: 张特 张亮 陆俊霏 文君 熊艺琏 刘莹
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 重楼皂苷Ⅰ 乳腺癌 凋亡 EGFR 分子对接
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 药理
• 页码范围: 721-729
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20210824.704

摘要

探讨重楼皂苷Ⅰ (polyphyllin Ⅰ,PPⅠ)抑制人乳腺癌细胞增殖及分子机制.以人乳腺癌细胞株BT474细胞、MDA-MB-436细胞为研究对象,设为空白组和不同浓度的PP Ⅰ处理组.采用MTT法、台盼蓝染色细胞计数实验、实时无标记动态细胞分析技术和克隆形成实验检测PP Ⅰ对2种细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1法检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3和PARP的表达及EGFR、Akt和ERK信号通路蛋白的表达及磷酸化水平;分子对接模拟PP Ⅰ与EGFR的结合方式及作用模式;基于靶点稳定性的药物结合实验检测PP Ⅰ与EGFR的直接结合作用.结果 表明,PP Ⅰ以时间和浓度依赖方式抑制细胞增殖及克隆形成.PP Ⅰ处理组的细胞凋亡率显著增加,线粒体膜电位显著降低;PP Ⅰ能下调caspase-3蛋白前体的表达,促进PARP切割.PP Ⅰ对EGFR、Akt和ERK总蛋白表达水平无明显影响,但明显能降低EGFR、Akt、ERK的磷酸化水平;分子对接模拟发现PP Ⅰ能够与EGFR胞外区发生结合,与其中Gln366残基形成氢键;靶点稳定性的药物结合实验进一步确证了PP Ⅰ能显著阻止了蛋白酶pronase对EGFR的水解作用,表明PP Ⅰ与EGFR具有直接结合作用.总之,PP Ⅰ能通过靶向EGFR阻断其下游信号通路抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡.该研究为PP Ⅰ后续在乳腺癌的靶向治疗药物的开发奠定了基础.