miR-191抑制视网膜血管内皮细胞增生和血管形成

• 作者: 赵琦 安伟婷 刘勃实 徐嫚鸿 东莉洁 李筱荣 韩金栋
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 关键词: 微RNAs 内皮，血管 转染 增生
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 49-55
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn511434-20210406-00176

摘要

目的:观察慢病毒（LV）介导miR-191对体外培养的人视网膜血管内皮细胞（hREC）增生和血管生成的抑制作用。方法:体外培养hREC细胞系，分为对照组、缺氧组、LV-空载体（LV-vector）组、LV-miR-191 （LV-191）组。LV-vector组、LV-191组分别转入相应的慢病毒载体。采用流式细胞仪检测细胞转染率；细胞计数试剂盒-8 （CCK-8）实验检测细胞增生能力；划痕实验和侵袭小室（Transwell）实验检测细胞迁移能力；Matrigel实验检测细胞管腔形成能力；实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-191相对表达量及其下游靶基因p21、血管内皮生长因子（VEGF）、细胞分裂蛋白激酶（CDK）6、细胞周期蛋白-D1 (Cyclin D1）mRNA相对表达量。两两比较采用独立样本 t检验。 结果:流式细胞仪检测结果显示，对照组、LV-191组细胞转染率分别为0.615%、99.400%。CCK-8、细胞划痕、Transwell细胞迁移、Matrigel实验结果显示，与对照组比较，缺氧组、LV-vector组细胞增生数量明显增多（ t=6.130、4.606 ）、细胞迁移率明显增高（ t=4.910、6.702 ）、微孔膜上染色的细胞数量明显增多（ t=7.244、6.724 ）、细胞管腔形成能力增强（ t=8.345、9.859），LV-191组细胞增生数量明显减少（ t=14.710）、细胞迁移率明显降低（ t=6.245 ），微孔膜上染色的细胞数量明显减少（ t=5.333）、细胞管腔形成能力明显减弱（ t=5.892 ），差异均有统计学意义（ P≤0.01）。qPCR检测结果显示，与对照组、LV-vector组比较，LV-191组细胞中miR-191 mRNA相对表达量明显上调（ t=44.110、42.680），Cyclin D1 （ t=29.940、14.010）、CDK6 （ t=15.200、7.645）mRNA相对表达量明显下降，差异均有统计学意义（ P<0.01）；p21 mRNA相对表达量增高，但差异无统计学意义（ t=2.013、2.755， P>0.05）。4组细胞中VEGF mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（ F=0.966， P>0.05 ）。 结论:miR-191可通过上调p21 mRNA表达，下调CDK6、Cyclin D1 mRNA表达，抑制hREC增生、迁移及管腔形成。