高中综合实验设计——以"表达和纯化红色荧光蛋白标记的类弹性蛋白"为例

• 作者: 张蕾
• 来源期刊: 生物学通报
• 学科: 教育
• 关键词: 类弹性蛋白 内含肽 生物工程 红色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 实验与技术
• 页码范围: 46-49
• 页数: 4页
• 分类号: G63
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0006-3193.2022.04.014

摘要

以类弹性蛋白(elastin-like polypeptide,ELP)作为非色谱纯化标签,分离纯化红色荧光蛋白 mCherry.ELP 与△ I-CM(intein cleavage mutant)的 N 端连接,mCherry 片段与△I-CM的C端连接,在ELP的N端插入GFP片段,用于检测蛋白纯度.采用低温诱导的方式实现重组蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中可溶性表达.可逆相变循环,分离纯化融合蛋白GFP-ELP-IN-mCherry,通过改变温度和pH诱导内含肽自剪切,再利用ELP的特性去除GFP-ELP-IN标签,得到目的蛋白mCherry.学生通过本实验可掌握蛋白质分离纯化技术,提高了动手实践的能力.