猪圆环病毒2型单管巢式PCR检测方法建立

• 作者: 夏嘉鑫 岳丰雄 林艳
• 来源期刊: 养猪
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 单管巢式PCR DBN-SX07株 ZJ/c株
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 猪病防制与保健
• 页码范围: 95-100
• 页数: 6页
• 分类号: S858.285.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-1957.2022.01.028

摘要

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原体.为建立一种灵敏度更高且特异性更强的分子检测技术,研究建立一种猪圆环病毒2型单管巢式PCR检测技术.首先利用梯度PCR方法验证内外引物的最佳退火温度;再利用正交试验设计的方法对单管巢式PCR反应体系的内外引物浓度、Ex Taq酶用量等相关因素进行优化.结果表明,当外引物PCV2-P1/P3退火温度为64.4℃,内引物PCV2-1/2退火温度为54.4℃,通过正交试验最终筛选出的最佳反应体系(25μL)为:2×Taq PCR Mastermix 10μL,100μmol/L的内引物PCV2-1/2各1μL,10μmol/L的外引物PCV2-P1/P3各0.2μL,模板DNA 2.5μL,ddH2O 10.1μL.上述反应体系仅对猪圆环病毒2型扩增出特异性目的条带,具有高度特异性,最低检测下限针对猪圆环病毒2型DBN-SX07株目的基因的最低DNA模板量为0.6×10-6 ng、ZJ/c株目的基因的最低DNA模板量为0.6×10-3 ng.研究建立的猪圆环病毒2型单管巢式PCR检测方法可以有效针对猪圆环病毒2型特异性检测.