人腺病毒7型DNA结合蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 朱云 张林琳 段亚丽 谢正德
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 人腺病毒7型 DNA结合蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 171-177
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112150-20211110-01043

摘要

目的:原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。方法:合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果:成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体，表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%，间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000，Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性，间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%（19/38）和63.2%（24/38）。结论:成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体，获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。