柠檬酸工业生产菌黑曲霉TNA09基因敲除体系的构建

• 作者: 张久祎 李洁 薛鲜丽 王德培 周昊
• 来源期刊: 食品研究与开发
• 关键词: 黑曲霉 柠檬酸 原生质体制备 原生质体再生 DNA转化
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 生物工程|Bioengineering
• 页码范围: 164-171
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.12161/j.issn.1005-6521.2022.03.025

摘要

黑曲霉TNA09是高产柠檬酸的工业生产菌株,由于经过多次物理和化学诱变筛选,所以对其进行传统遗传改造非常困难.该试验成功构建黑曲霉TNA09原生质体转化方法,实现该工业菌株的基因工程操作.通过试验得出原生质体制备和再生的最佳条件:取CM斜面培养5 d的新鲜孢子约1×108个至100 mL马铃薯葡萄糖肉汤(potato dextrose broth,PDB)液体培养基,于37℃、180 r/min摇床培养17 h,取幼嫩菌丝0.70 g至1.50％裂解酶+0.50％蜗牛酶+0.20％溶菌酶的复合酶体系中,37℃处理3.25 h,该条件下原生质体再生率可达36％,并利用聚乙二醇(polyethylene-glycol,PEG)-CaCl2介导的原生质体转化方法一次成功将黑曲霉laeA、cexA基因敲除,为后续的柠檬酸工业菌株的分子改造奠定了坚实基础.