凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺优化及分离纯化

• 作者: 唐振冬 邵海艳 张迪 刘书成 吉宏武 徐杰 太敏瑞 苏伟明 梁善昊 何旋
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 凡纳滨对虾 组织蛋白酶L 分离纯化 工艺优化 蛋白降解
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 71-78
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027737

摘要

优化凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺,分离纯化组织蛋白酶L并验证其对肌原纤维蛋白的降解作用.以凡纳滨对虾肌肉为原料,采用单因素试验、Plackett-Burman试验和双因素等重复试验对肌肉中组织蛋白酶L的提取工艺进行了优化.采用Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、Q-Seharose F.F阴离子交换层析、Sephacryl S-100凝胶过滤层析和SDS-PAGA等方法对组织蛋白酶L粗酶液进行分离纯化,并验证提纯后的组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白的降解作用.最终确定对虾肌肉中组织蛋白酶L最佳提取工艺为:缓冲液体系(Tris-HCl缓冲液浓度40 mmol/L,半胱氨酸浓度6 mmol/L,苯甲基磺酰氟浓度0.4 mmol/L),料液比1:8(g:mL),pH 6.0.优化后组织蛋白酶L总酶活力值升至378.36 U,酶活力得率达到150.1 U/g,纯化后的组织蛋白酶L的比活力从0.34 U/mg提高到了101.15 U/mg,纯化倍数达到298.28倍,得率为16.50％,分子质量为46.4 kDa,并进一步验证了提纯后的组织蛋白酶L对肌球蛋白重链和肌动蛋白有降解作用.发现对虾肌肉中组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白降解有明显作用,为进一步研究对虾肌肉中组织蛋白酶L的相关性质及其对肌肉的降解机制提供理论依据.