特异性水解αs1-酪蛋白过敏原IgE作用表位aa 83～105的蛋白酶筛选

• 作者: 刘迪 吕晓哲 丛艳君 张倩倩 李邻峰 梁萌 高吉安 邱学宇
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: αs1-酪蛋白 作用表位 单克隆抗体 抗原残留量 蛋白酶
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 生物工程|Bioengineering
• 页码范围: 126-133
• 页数: 8页
• 分类号: TS252.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20201111-112

摘要

探索特异性水解αs1-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法.首先通过固相合成法合成αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),以6αs1-酪蛋白制备的单克隆抗体及建立的方法为对照.结果 表明:合成作用表位的纯度在90％以上,与BSA偶联比为6.31.单克隆抗体的亚型为IgG1,效价可达到1∶320000,可以与αs1-酪蛋白发生特异性免疫反应,与大豆蛋白无交叉反应.建立的间接竞争ELISA,竞争抑制曲线回归方程为y=-9.22x+ 100.78 (R2=0.9891),方法重复性、精确性均较好,检出限低于αs1-酪蛋白单克隆抗体建立的方法,初步筛选到木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解液的抗原残留量较小,需要进一步通过体内实验验证结果.αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105 G1型单克隆抗体制备成功,为新型αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105低致敏配方粉的开发,提供了ELISA检测高灵敏专用单克隆工具抗体.