小分子化合物毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤诱导骨髓间充质干细胞分化为许旺细胞样表型的可能性

• 作者: 吴小松 龚超 娄盼 王伟
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 毛喉素 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 许旺细胞 cAMP PKA 通路
• 年，卷（期）: 2022,（30）
• 所属期刊栏目: 骨髓干细胞|Bone marrow stem cells
• 页码范围: 4787-4792
• 页数: 6页
• 分类号: R459.9|R318|R394.2
• 语种: 中文

摘要

背景:周围神经损伤是一种主要由创伤等因素引起的临床常见疾病,研究表明,由骨髓间充质干细胞转分化的许旺细胞可以促进周围神经损伤的修复与重建,但其诱导方法尚未达成共识,并且细胞神经转分化的机制仍尚不明确.目的:探讨小分子化合物(毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)诱导骨髓间充质干细胞分化为许旺细胞的可行性,以及该诱导过程与cAMP/PKA通路的相关性.方法:采用全骨髓贴壁法从1周龄SD乳鼠四肢骨骨髓中提取出原代骨髓间充质干细胞,运用细胞免疫荧光对其进行鉴定,并用CCK-8法检测各代骨髓间充质干细胞在不同培养时间点的增殖活性变化,以小分子化合物对骨髓间充质干细胞进行体外诱导分化,实验分为3组:对照组用神经生长培养基处理120 h、诱导组用神经生长培养基+毛喉素+3-异丁基-1-甲基黄嘌呤处理120 h、抑制组用神经生长培养基+毛喉素+3-异丁基-1-甲基黄嘌呤+cAMP抑制剂SQ22536处理120 h,每60 h更换1次培养基.通过细胞形态学、Western blot等技术对许旺细胞样细胞进行鉴定及相关分析,同时检测分化过程中cAMP相关蛋白的表达.结果 与结论:①细胞免疫荧光染色显示分离培养的原代细胞能够被CD44和CD90标记,CCK-8结果显示在相同培养时间点,第1-3代骨髓间充质干细胞增殖活性逐渐增加,第3-6代骨髓间充质干细胞增殖活性逐渐降低;②Western blot结果显示小分子化合物诱导后许旺细胞特异性标志物S100β、GFAP和p75以及cAMP相关蛋白p-CREB表达均明显增加(P<0.001;P<0.001;P<0.05;P<0.0001),而cAMP/PKA抑制剂SQ22536可以抑制这一效应(P<0.01;P<0.01;P<0.05;P<0.001);③结果 表明,该小分子化合物可以诱导骨髓间充质干细胞分化为许旺细胞表型,并且诱导过程中可能激活了cAMP/PKA通路.