H7亚型禽流感病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 蒋文明 李金平 尹馨 彭程 刘朔 李阳 于晓慧 王静静 刘华雷
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 禽流感病毒 H7亚型 数字PCR
• 年，卷（期）: 2023,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 39-43
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

为了建立灵敏、特异的H7亚型禽流感病毒(AIV)微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法，本研究根据GenBank和GISAID中H7亚型AIV血凝素(HA)基因的核苷酸序列，设计合成H7亚型AIV的引物和探针，对反应条件进行优化，从而建立检测H7亚型AIV的ddPCR方法，并测定其特异性、敏感性和重复性。结果显示，最佳引物浓度和探针浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L，最佳退火温度为55℃，最佳升降温速率为2.0℃/s，最佳反转录时间为20 min。特异性试验结果显示，该方法仅对H7亚型AIV进行特异性检测，对H5亚型AIV、H9亚型AIV、新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病毒均不能检出。敏感性试验结果显示，该方法对重组质粒标准品检测下限为0.8 copies/μL，比荧光定量PCR(qPCR)方法敏感性高10倍。组内和组间重复性试验结果显示，变异系数均小于3%。对60份临床样品检测显示，该方法与鸡胚分离方法的符合率为100%。结果表明，本研究建立的H7亚型AIV ddPCR检测方法具有较好的特异性、重复性和敏感性，可用于H7亚型AIV的早期诊断、流行病学调查、诊断方法评估、标准物质研制、免疫效果评估，为H7亚型AIV的科学防控和研究提供了有力的技术储备。