circFAT1对胶质母细胞瘤细胞生物过程的机制研究

• 作者: 张立群 乌日吉木斯 郑晓明 汪琳 韩玉秀 张薇 阎涛
• 来源期刊: 天津医药
• 学科: 其他
• 关键词: 胶质母细胞瘤 细胞增殖 转化生长因子β 微RNAs circFAT1 上皮间充质转化
• 年，卷（期）: 2024,（8）
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20230224

摘要

目的 探讨circFAT1吸附miR-1182调控转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路对胶质母细胞瘤(GBM)增殖、侵袭、上皮-间充质转化(EMT)的调控作用及机制.方法 收集50例GBM样本和5例非瘤脑组织(NBT)样本,随机抽取3例GBM和3例NBT样本进行组织RNA测序.体外培养GBM细胞系U87、U251、T98G、LN229及星形胶质细胞系NHA,通过qRT-PCR检测组织和细胞系中circFAT1表达.通过RNase R选择性降解线性转录本以明确circFAT1成环特性.将GBM细胞分为sh-对照组和sh-circFAT1组,采用慢病毒进行转染.转染后集落形成实验、Transwell实验、Western blot实验分别检测细胞增殖、侵袭及EMT能力.荧光原位杂交(FISH)检测circFAT1在GBM细胞内定位,通过双萤光素酶报告基因和RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证circFAT1和miR-1182的相互作用.Western blot实验验证敲低circFAT1后或抑制miR-1182表达对TGF-β/Smad信号通路的调控作用.结果 circFAT1在GBM组织和细胞中表达增加(P＜0.05).RNase R可减少线性FAT1表达(P＜0.05),而不影响circFAT1.敲除circFAT1抑制了GBM细胞的增殖、侵袭和EMT(P＜0.05).双萤光素酶报告基因和RIP实验证实circFAT1靶向结合miR-1182.敲低circFAT1后TGFB2、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达下降,抑制miR-1182表达后GFB2、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达升高.结论 敲除circFAT1可抑制GBM细胞增殖、侵袭和EMT,其作用机制可能与吸附miR-1182调控TGF-β/Smad信号通路有关.