沉默Sp5对mEPMCs中Wnt信号通路相关因子及 增殖能力的影响

• 作者: 柏宇 兰雪娇 唐璟 文雨 吕明敏 宋庆高
• 来源期刊: 天津医药
• 学科: 其他
• 关键词: Sp转录因子类 Wnt信号通路 细胞增殖 腭突间充质细胞 Sp5基因
• 年，卷（期）: 2024,（12）
• 页码范围: 34-41
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20230521

摘要

目的 探讨沉默转录因子特异蛋白5(Sp5)对小鼠胚胎腭突间充质细胞(mEPMCs)中Wnt信号通路相关因子及增殖能力的影响.方法 体外分离并培养孕14.5 d C57BL/6J小鼠的mEPMCs,细胞免疫荧光染色鉴定细胞来源;利用慢病毒转染技术沉默mEPMCs中Sp5基因的表达,Western blot验证转染效率.后续实验设空白对照组、空载病毒组、沉默组(Sp5-shRNA组).各组细胞转染72h后,采用Western blot及RT-qPCR法分别检测β-连环蛋白(β-catenin)、丝氨酸/苏氨酸激酶(GSK-3β)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)、特异性周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白及mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;免疫荧光法检测5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)阳性细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期.结果 成功分离mEPMCs并沉默Sp5的表达.Western blot及RT-qPCR结果显示,Sp5-shRNA组β-catenin、GSK-3β、Wnt3a、CyclinD1蛋白及mRNA表达水平均高于空白对照组和空载病毒组(P＜0.05);Sp5-shRNA组细胞增殖能力和EdU阳性细胞增殖率均高于空白对照组和空载病毒组(P＜0.05);Sp5-shRNA组mEPMCs处于S期的细胞比例高于空白对照组和空载病毒组(P＜0.05).结论 沉默mEPMCs中Sp5可通过对Wnt信号通路的调控来参与腭的发育,促进mEPMCs的增殖.