下调miR-31抑制心肌细胞凋亡并防止心肌缺血再灌注损伤的机制研究

• 作者: 樊开凯 路万里 阮昕华 徐亚威 师强伟 梁振兴
• 来源期刊: 中西医结合心脑血管病杂志
• 关键词: 心肌缺血再灌注损伤 心肌细胞损伤 microRNA-31 细胞凋亡 实验研究
• 年，卷（期）: 2024,（23）
• 所属期刊栏目: 基础医学论著/研究
• 页码范围: 52-59
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

目的:探究microRNA-31(miR-31)在心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤及大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法:通过inhibitor-miR-31及空病毒载体构建miR-31低表达心肌细胞，采用H/R建立心肌细胞损伤模型，缺氧4 h再复氧2 h,采用定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞miR-31 mRNA相对水平，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、活化半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、活化半胱氨酸蛋白酶9(Cleaved Caspase-9)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)、Bcl相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达。将Wistar大鼠分为对照组、MIRI组、MIRI+inhibitor-NC组和MIRI+inhibitor-miR-31组，每组24只，MIRI+inhibitor-NC组和MIRI+inhibitor-miR-31组大鼠心肌内注射携带inhibitor-NC、inhibitor-miR-31的慢病毒载体，7 d后，采用左冠状动脉结扎法构建MIRI模型。慢病毒载体注射后14 d,超声仪检查大鼠心率(HR)、左心室壁厚度(LVWT)、左心室收缩末期容积(LVESV)和左室射血分数(LVEF),qRT-PCR检测心肌组织miR-31 mRNA相对水平，氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测心脏梗死面积百分比，苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理损伤，缺口末端标记法(TUNEL)染色观察心肌组织凋亡率，酶联免疫吸附法检测血清心肌肌钙蛋白-I(cTnI)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平，Western Blot检测心肌组织凋亡相关蛋白表达。结果:与对照组比较，H/R组心肌细胞miR-31 mRNA相对水平、细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与H/R组比较，H/R+inhibitor-miR-31组心肌细胞miR-31mRNA相对水平、细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。与对照组比较，MIRI组大鼠心肌组织miR-31 mRNA相对水平、梗死面积百分比、细胞凋亡率、LVESV和血清cTnI、CK、CK-MB水平升高(P<0.05),Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达升高(P<0.05),HR、LVWT、LVEF、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与MIRI组比较，MIRI+inhibitor-miR-31组大鼠心肌组织miR-31 mRNA相对水平、梗死面积百分比、细胞凋亡率、LVESV和血清cTnI、CK、CK-MB降低(P<0.05),Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达降低(P<0.05),HR、LVWT、LVEF和Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:抑制miR-31表达能通过增强心肌细胞抗凋亡作用，改善心肌缺氧再灌注损伤。