中美山杨茎尖超低温保存技术

• 作者: 马元东 王兆宁 韩文哲 田林平 齐雨 李春明 刘焕臻 白卉
• 来源期刊: 东北林业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 中美山杨;茎尖;超低温保存;遗传稳定性
• 年，卷（期）: 2025,（4）
• 页码范围: 61-66,78
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13759/j.cnki.dlxb.2025.04.004

摘要

以中美山杨Z9-1组培苗茎尖为材料，在分化培养基(MS培养基+6-苄氨基嘌呤(6-BA)质量浓度为0.5 mg/L+萘乙酸(NAA)质量浓度为0.05 mg/L+蔗糖质量浓度为20 g/L+琼脂质量浓度为7 g/L)上诱导无菌苗，于生根培养基(0.5倍浓度的MS+吲哚丁酸(IBA)质量浓度为0.5 mg/L+萘乙酸(NAA)质量浓度为0.02 mg/L+蔗糖质量浓度为20 g/L+琼脂质量浓度为7 g/L)中诱导生根，组培苗按照4周的继代周期继代保存；在试验设计的玻璃化超低温保存程序基础上，采用单因素试验(低温锻炼、预培养、玻璃化溶液处理时间)对保存程序进行优化试验，测定超低温保存后，中美山杨成活率、渗透调节物质(可溶性蛋白、可溶性糖、游离脯氨酸)质量分数、成活茎尖的组织学观察(细胞结构)、遗传稳定性；分析低温锻炼时间、预培养处理、玻璃化溶液处理时间，对中美山杨组培苗超低温保存成活率的影响，筛选最优试验条件，构建中美山杨茎尖玻璃化法超低温保存体系。结果表明：将冷锻炼4周的中美山杨组培苗，剥取茎尖并接种在“蔗糖浓度为0.7 mol/L+甘油浓度为2 mol/L”的预培养基中；4℃黑暗条件培养3 d,室温装载处理20 min;随后用PVS3(蔗糖为50%+甘油为50%)处理60 min,并立即投入液氮冻存1 h;取出后转入40℃水浴中快速化冻1 min,再用卸载溶液在室温下洗涤20 min,置于恢复培养基上暗培养1周后，茎尖成活率为88.89%。利用简单重复序列区间(ISSR)分子标记检测，再生苗的遗传稳定性未发生改变。