大肠杆菌菌株(λ衍生噬菌体)/PBR322衍生质粒作为人IL-6表达系统的研究

• 作者: 刘世广 狄凯军 章秋珩 章静波
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-6(IL-6) 大肠杆菌(λ衍生噬菌体)[BL21(DE3)] 聚合酶链反应(PCR)
• 年，卷（期）: 1998,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 401-403
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.1998.04.015

摘要

为探索人白细胞介素-6(IL-6)在原核细胞中高效表达的途径,选用BL21(DE3)/PET-28作为表达系统,以聚合酶链反应(PCR)技术扩增了hIL-6的互补DNA(cDNA)的编码区,引入了EcoRI和Hind Ⅲ位点.用限制性内切酶EcoRI和Hind Ⅲ酶切后,克隆于PET-28载体的相应位点,转化DH5α.选出阳性克隆,经DNA序列分析,表明其编码区内无非特异突变.将重组质粒转入DH5α,筛选阳性克隆,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.全细菌裂解液进行十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),结合固化蛋白质的免疫学测定(Western-blot)杂交进行分析.结果表明:Western-blot杂交发现有与抗IL-6特异结合的蛋白带,以4h的产量最多,激光扫描显示IL-6的吸收峰占总吸收面积的37%(4h诱导).分子量约为27kD.实验显示,人IL-6在原核细胞中实现了高效表达,表达产物具有IL-6的免疫活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	狄凯军	中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所	7	86	3.0	7.0
2	章静波	中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所	46	176	6.0	12.0
3	刘世广	中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所	2	6	1.0	2.0
4	章秋珩	中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所	1	5	1.0	1.0