体外培养骨髓基质细胞向软骨细胞分化的研究

• 作者: 卢森桂 王万明 胡蕴玉
• 来源期刊: 福州总医院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 软骨细胞 骨髓基质细胞 结节 皮下 Ⅲ型胶原 植入 阴性 阳性 裸鼠 体外培养
• 年，卷（期）: fzzyyxb,（1）
• 页码范围: 15-18
• 页数: 4页
• 分类号: R329

摘要

目的：骨髓基质细胞由处于不同分化阶段的多种细胞组成，一般认为它包括成骨细胞、成纤维细胞、脂肪细胞、网状细胞及其千细胞，为一异质细胞群，其中的干细胞具有多向分化能力。直接应用MSC修复关节软骨，新生透明样软骨容易发生退变，其异质性是重要原因之一。体外培养条件下诱导MSC分化为较为单一的软骨细胞将有助于提高新生软骨的质量及促进其表型维持。Eplrat采用高密度培养技术诱导MEC分化为软骨细胞，但是一部分细胞分化为成骨细胞，体外形成钙化结节。所用培养液含10％FBE、VitC50ng/ml、Dex0．4μg/ml、bFGF25mg/ml。本研究调整培养液，使MSC分化为软骨细胞。方法：抽取新西兰大耳白兔骨髓于DMEM中培养扩增，DMEM培养液中含10％FES．VitC（50ng/ml），青霉素(100μ／ml)，链霉素(100μ/ml)。之后高密度(1×10^cells／cm^2)和低密度(1×10^4cells／cm^2)传代培养．观察细胞形态变化，甲苯胺兰、ALP染色，I、Ⅲ型胶原和S-100免疫组化染色以封断MSC的表型转化，收集细胞植入BALB／Cnu．,'nu品系裸鼠皮下观察骨、软骨形成情况。结果：低密度传代后MSC贴壁生长。形成CFU—R呈成纤维细胞样，甲苯胺兰染色阴性，Ⅲ型胶原阳性，植入裸鼠皮下3w形成骨软骨组织结节。高密度传代后90～95％MSC甲苯胺兰染色阳性，S-100阳性，Ⅰ、Ⅲ型胶原阴性，具有软骨细胞的功能表型；植入裸鼠皮下形成软骨组织性结节，没有骨组织形成。结论：在本实验条件下，用不含Dex、bFGFF的DMEM，高密度传代培养可诱导骨髓基质细胞分化形成软骨细胞，未见钙化结节的形成，ALP染色阴性，未测出有骨钙素合成，获得MSC源性软骨细胞。