戊型肝炎病毒（HEV）开读框架2（ORF2）1．3kb基因片段在甲基营养型酵母（Pi

• 作者: 张春江 沈心亮
• 来源期刊: 生物制品年刊
• 学科: 医学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 巴斯德毕赤酵母 表达载体 电转化 诱导表达
• 年，卷（期）: 1999,（1）
• 页码范围: 105-106
• 页数: 2页
• 分类号: R373.21

摘要

戊型肝炎病毒（HEV）整个基因组有3个开放性阅读框架（ORFs)，ORF2是主要结构基因编码区，将戊型肝炎病毒（HEV）ORF21．3kb基因定向亚克隆到甲基营养型酵母－巴斯德毕赤酵母（Pichia Pastoris)分泌性表达质粒pHIL-S1和pPIC9中，转化入大肠杆菌，筛选出阳性重组株，重组质粒pPIC9HEV和pHILS1HEV分别经限制性内切酶Sal I和Bg1 II线化，电转化入巴斯德毕赤酵母GS115。与宿主GS115染色体发生整合，整合方式不同，产生两种表型，分别为HIS＋MUT＋）甲醇诱导快的，HIS＋MUTS（甲醇诱导慢的），通过营养缺陷性选择性培养基筛选出阳性菌株，经PCR技术确认外源基因整合在酵母染色体中，重组菌株先在甘油培养基中充分增殖，然后转移到甲醇培养基中诱导，取上清液，用ELIAA，SDS－PAGE，Western-blot检测到特异性HEVORF2蛋白，得到有效表达HEVORF2蛋白的菌株。