人组织性纤溶酶原激活物衍生物在大肠杆菌硫氧化还原蛋白融合表达系统中的表达

• 作者: 易进华 李军 王海波 苏勇 谭靖伟
• 来源期刊: 生物工程进展
• 学科: 医学
• 关键词: 组织型纤溶酶原激活物 硫氧化还原蛋白 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2000,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 63-67
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3529字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2000.06.015

摘要

目的:克隆含tPA中355个氨基酸密码子(1-3和176-527氨基酸)的cDNA序列(tPA355),将其在大肠杆茵融合蛋白表达系统中表达,并在体外复性使其具有激活纤溶酶原的生物活性.方法:采用RT-PCR技术从人黑色素瘤细胞Bowes中克隆出tPA355 cDNA,然后在pET32a(+)BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中表达,将表达出的融合蛋白Trx-tPA355(Thioredoxin,Trx)包涵体在体外进行变性、复性和纯化以使其具有激活纤溶酶原的生物活性.结果:测序结果表明本研究克隆的编码tPA中355个氨基酸密码子的cDNA序列与美国专利(公开号:5,587,159)中对应的序列完全一致,将其在pET32a(+)/BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中表达可获得稳定表达的融合蛋白Trx-tPA355包涵体,该包涵体占菌体总蛋白的30%左右,此融合蛋白经变性、复性后具有激活纤溶酶原的生物活性.结论:含tPA中355个氨基酸密码子(1-3和176-527氨基酸)的cDNA在大肠杆茵TrX融合蛋白表达系统中可获得稳定表达,表达的融合蛋白产物在体外经变性、复性后具有激活纤溶酶原的生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	易进华		9	41	5.0	6.0
2	李军		5	22	3.0	4.0
3	苏勇	浙江大学医学院肿瘤所	1	10	1.0	1.0
4	谭靖伟		2	13	2.0	2.0
5	王海波		2	10	1.0	2.0