转基因小鼠中人清道夫受体AI基因的稳定遗传和特异表达

• 作者: Sookja Kim CHUNG Stephen S.M.CHUNG 万腊香 万载阳 吴孟津 曹德良 杨永宗 陈修
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人清道夫受体AI 小鼠,转基因 遗传 基因表达 内皮,血管 动脉粥样硬化
• 年，卷（期）: 2000,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 5-12
• 页数: 8页
• 分类号: R3
• 字数: 5887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2000.01.003

摘要

为阐明人清道夫受体AI (hSR-AI)的功能及在动脉粥样硬化发生中的作用,本研究首先构建了含鼠 tie-1启动子和人清道夫受体AI cDNA的表达载体,经酶切及测序鉴定后,用显微注射的方法将制备好的tie-1-hSR-A-BGH poly A片段注入受精卵,将注射后存活的受精卵移入IC R假孕母鼠,产下的仔鼠经聚合酶链反应和Southern blot分析,筛选出整合有外源目的基因的阳性转基因鼠;对小鼠组织RNA行逆转录聚合酶链反应及组织切片免疫组织化学染色,检测人清道夫受体AI在小鼠体内的表达水平及表达部位;光镜及电镜观察转基因鼠血管及其它组织的病理变化.结果发现, 重组Tie-1/hSR-AI质粒中鼠tie-1启动子和人清道夫受体AI cDNA序列正确,显微注射后存活的 561枚受精卵分别移入19只ICR假孕母鼠,有13只受孕,共产下56只仔鼠,存活54只,经过整合检测 ,检出7只阳性鼠,整合效率为13%.在G1、 G2、 G3 代及纯合子转基因鼠中PCR阳性率分别为47.8%、 71.3%、 75.0% 和 100%.5只雄性转基因鼠的主动脉、肾、肝等组织中均有人清道夫受体 AI表达,且主要集中在血管的内皮细胞上;转基因鼠主动脉内皮细胞明显水肿,表面呈多囊状和虫蚀样改变,胞质中有较多水泡,中膜有糖原沉积样灶性病变,平滑肌细胞中亦有水肿 ;血浆甘油三酯水平明显高于非C57BL/6鼠(P<0.05),总胆固醇水平虽不比C57BL/6高,但雄性鼠总胆固醇水平明显高于雌性(P<0.01).这些结果提示,已成功建立了鼠tie-1启动子驱动人清道夫受体AI在血管内皮细胞特异性表达的转基因鼠.外源基因能在子代鼠中稳定遗传.转基因鼠血管出现内膜水样变性及中膜粘液样变性等动脉粥样硬化的早期病理改变,表明人清道夫受体AI转基因鼠可能易感动脉粥样硬化,成为新的动脉粥样硬化模型.