简化的差示PCR技术在伯氏疟原虫氯喹抗性基因分离中的应用

• 作者: 严继舟 宋关鸿
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ：伯氏疟原虫 氯喹抗性 差示PCR 磷脂酶
• 年，卷（期）: 2000,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: R382.3+1
• 字数: 3501字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2000.06.004

摘要

目的为探察伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和敏感株(N株)的遗传学差异。方法先维持对RC株连续大剂量氯喹治疗(50mg／(kg·d)，再通过简化逆转录差示多聚酶链反应技术(sDDRT-PCR)寻找RC株和N株疟原虫cDNA差异片段并对所产生的可疑差异片段进行反复的DNA回收和PCR鉴定，然后选其肯定的差异片段(N25和R25)作克隆测序和序列分析及同源性检索。结果尽管差异片段N25和R25的克隆分子N252和R251的DNA序列相同性为99.8％，但由于多点突变导致它们的编码氨基酸及其模拟二级结构出现很大差异。BLAST(2.06)检索未能在基因库中发现与R251和N252相似的基因序列，不过它们的部分核苷酸序列(从128nt到189nt)与褐鼠磷脂酶BmRNA部分序列(从1053nt到1114nt)具有高度同源性：在R251和N252分别为93.5％和91.9％。结论简化的差示PCR技术结合差异片段的反复验证和序列分析可用于氯喹抗性相关基因的分离。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋关鸿	第二军医大学病原生物学教研室	22	64	4.0	6.0