伯氏疟原虫电穿孔转染方案的优化

• 作者: 宋亚彬 张东娜 徐力昆 杜靖 王保刚 王洪权 王红 窦媛媛 贝祝春
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 伯氏疟原虫 转染效率 电转染 电穿孔 流式细胞仪 mKate2
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 949-954
• 页数: 6页
• 分类号: R382.31
• 字数: 5002字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2018.12.013

摘要

目的 通过在不同电转染方案下对电转染外源DNA到伯氏疟原虫效率进行对比,筛选优化出最佳的电转染方案.方法 以mKate2为报告基因构建环状质粒pL0035-mKate2-3UTR,饲养昆明小鼠在体培养伯氏疟原虫(Plasmodium berghei),达到相应寄生率后体外同步化培养疟原虫,Nycodenz梯度离心纯化疟原虫成熟裂殖体,利用Lonza公司Nucleofector核转染系统对伯氏疟原虫进行电转染,采用流式细胞仪分析电转染效率,并提取昆明小鼠全血DNA作为模板进行PCR扩增,鉴定转染结果.结果 经转染后流式细胞仪分析和血涂片吉姆萨染色镜下观察,Lonza Nucleofector 4D核转染系统电转染程序FI115与FP167均可使转染效率达到10-3,FP167下转染10μg环状质粒效率接近10-2.在相同电转染条件下,外源DNA越多,转染效率越高.结论 优化得到伯氏疟原虫电转染较好方案,为后续疟原虫药物、疫苗及生物学相关研究提供了可靠、高效的转染方案.