白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库的构建

• 作者: 吴瑜 周国理 王玲 陆家海 黄炯烈
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 学科: 医学
• 关键词: 白纹伊蚊 杀虫剂抗性 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 92-98
• 页数: 8页
• 分类号: R38
• 字数: 4949字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2001.02.006

摘要

目的:构建白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库.方法:抽提、纯化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫总RNA,进行反转录合成第1链cDNA;用C1ontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒进行长距离PCR,合成全长双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K消化、提纯后,进行Sfi I酶切;用Chroma Spin-400柱将酶切产物进行分级分离,然后经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收400bp以上的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌体,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果:经检测,未扩增文库滴度达2.0×107pfu/mL,重组效率在10-4稀释度时每块平板约210～255个噬菌斑中均未发现任何蓝色噬斑,扩增文库滴度达1.75×109pfu/mL;用载体克隆位点两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:所选9个噬菌体中均含有重组的cDNA,并且均在500bp以上,其中1kb以上的有2个、700bp的有5个、500bp的有2个.结论:已成功地获得一高质量的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄炯烈	中山医科大学寄生虫学教研室	16	128	6.0	10.0
2	吴瑜	中山医科大学寄生虫学教研室	10	40	5.0	5.0
3	王玲	中山医科大学寄生虫学教研室	13	124	5.0	11.0
4	陆家海	中山医科大学寄生虫学教研室	13	74	4.0	8.0
5	周国理	中山医科大学寄生虫学教研室	11	88	5.0	9.0