重组人钙调素的制备及其对细胞增殖作用影响的研究

• 作者: 司峻岭 徐建平 李晓军 武建国 郭大文
• 来源期刊: 实验生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 钙调素 基因表达 大肠杆菌 细胞增殖三氟拉嗪 K562 SP2/0
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 页码范围: 131-136
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4134字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-520X.2001.02.008

摘要

用PCR方法获得人钙调素基因Ⅲ(hCaMⅢcDNA),将其插入表达载体pBV220,构建重组表达质粒hCaMⅢ/pBV220,阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDS-PAGE分析,可观察到一分子量与理论值相符(约17kD)的诱导表达条带.进一步分析表达产物的性质表明,CaM主要以可溶性形式表达.Western blot结果证实,17kD的表达条带可与标准鼠抗CaM McAb起特异反应.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物,可获得纯度达95%以上的CaM,每1L菌液可获CaM纯品3～4mg.生物活性测定结果提示,rhCaM具有与标准人脑CaM(Sigma)同样的激活NAD激酶的活性.将K562细胞及SP2/0细胞分别接种于24孔或96孔培养板,加入不同浓度rhCaM、CaM拮抗剂三氟拉嗪(TFP),培养48h后,用MTI比色法检测细胞增殖状况.rhCaM在一定浓度范围内与细胞增殖率成显著正相关;CaM拮抗剂TFP可抑制细胞增殖.将rhCaM加入已受TFP抑制的细胞,可恢复正常的细胞增殖功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓军	南京军区南京总医院全军医学检验中心	109	618	13.0	19.0
2	武建国	南京军区南京总医院全军医学检验中心	139	1275	16.0	31.0
3	徐建平	南京军区南京总医院全军医学检验中心	24	282	10.0	16.0
4	司峻岭	南京军区南京总医院全军医学检验中心	2	4	1.0	2.0
5	郭大文	南京军区南京总医院全军医学检验中心	2	10	1.0	2.0