四环素抗性表型筛选外源基因高效表达克隆

• 作者: 孙声桃 张智清 李玉富 李福胜 李继昌
• 来源期刊: 河南医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 四环素抗性 hGM-CSF 克隆 筛选
• 年，卷（期）: 2001,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 267-271
• 页数: 5页
• 分类号: Q533+8
• 字数: 2977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2001.03.012

摘要

目的：应用四环素抗性表型从外源基因的cDNA文库中筛选高效表达克隆。方法：将四环素抗性基因（TetR）克隆到载体pBV220中构建筛选载体pBV223；根据氨基酸密码子的简并性，在保持原有氨基酸序列不变的情况下，人工合成外源基因的cDNA 5′端简并引物库，以hGM-CSF基因为例进行筛选。把hGM-CSF cDNA简并文库克隆到pBV223中的TetR上游位置，构建pBV223/hGM-CSF克隆文库，导入大肠杆菌DH5α中，构建转基因的细菌文库，在不同质量浓度（20 mg/L,40 mg/L,50 mg/L,60 mg/L）的四环素培养基中培养。结果:从高浓度四环素培养基中获得高效表达的pBV223/hGM-CSF克隆，测序结果显示该克隆的hGM-CSF cDNA 5′端序列与天然序列比较有7个碱基发生突变，且符合实验设计的要求。通过基因重组，构建成最终的高效表达克隆pBV220/hGM-CSF ，其表达hGM-CSF 的量占细菌总量的18%，较原表达水平提高80%。结论:可通过四环素抗性筛选系统筛选外源基因的高效表达克隆。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉富	河南省肿瘤医院生物治疗中心	48	96	5.0	7.0
2	孙声桃		30	181	8.0	12.0
3	张智清	中国预防医学科学院病毒学研究所	19	87	5.0	8.0
4	李继昌	河南医科大学第一附属院内科	14	130	6.0	11.0
5	李福胜	中国预防医学科学院病毒学研究所	1	0	0.0	0.0