四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37表达细胞系的建立

• 作者: 刘文斌 孟麟 寿成超 张建芝 龚曼曼
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 四环素 支原体属 癌基因蛋白质v-mos 细胞系
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 575-578
• 页数: 4页
• 分类号: R73-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-167X.2005.06.003

摘要

目的:建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础.方法:构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的最适时间和浓度.通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响.结果:转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外.四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白.四环素质量浓度在2 mg/L并作用60 h其表达水平即可达到最高峰.P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用.结论:已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	寿成超	北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室	34	78	4.0	7.0
2	刘文斌	北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室	7	95	4.0	7.0
3	孟麟	北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室	13	29	2.0	5.0
4	张建芝	北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室	3	6	2.0	2.0
5	龚曼曼	北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室	2	4	2.0	2.0