摘要:
该研究以美国南部重要的造纸工业用材树种火炬松为材料,利用Transgenomic公司最近推出的WaveR DNA片段分析系统,快速检测肉桂醇脱氢酶(CAD)基因在个体间的单核苷酸多态性,获得了令人满意的结果.首先利用Oligo 5.1软件对火炬松CAD基因全序列分区域进行引物设计,当设定每一区域能扩增出100~200 bp产物时,共在8个碱基区域(S1~S8)分别设计出了最佳正向引物和反向引物;以来自火炬松12株优树自由授粉种子的胚乳中提取的DNA为材料,对CAD基因8个碱基区域分别进行PCR扩增,有5个碱基区域(S3,S5,S6,S7,S8)得到了唯一的并且与预期碱基长度基本一致的PCR扩增产物,对其余3个碱基区域进一步进行FailSafeTM PCR扩增,它们均在某些PCR缓冲液中得到了唯一的扩增产物;利用WaveR DNA片段分析系统,对6个碱基区域(S2,S3,S5,S6,S7,S8)进行单核苷酸多态性检测,结果表明来自优树2-2的种子与其它11株优树的种子之间存在碱基序列变异,其中在S5,S6区域检测到了较大的单核苷酸多态性,这两个区域分别位于CAD基因的第2和第3内含子(Intron2,Intron3).