用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体ββ基因

• 作者: 俞梅敏 宁叶 宋凌云 施定基 罗娜 茹炳根 邵宁
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人肝金属硫蛋白ββ突变体 集胞藻6803 单交换 同源重组 蓝藻基因工程 铜去除
• 年，卷（期）: 2001,（4）
• 页码范围: 399-404
• 页数: 6页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 4296字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2001.04.013

摘要

将集胞藻(Synechocystissp.)PCC6803上psbB的一段序列(从#693bp到#2563bp)插入pBluescriptKS的多克隆位点，构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的ββ基因插入中间载体pRL-439上启动子PpsbA的下游，并将pRL-ββ上PpsbA和ββ基因插入pKSB构建成整合表达载体pKSB-ββ。利用自然转化将整合表达载体导入集胞藻6803，并通过单交换同源重组使ββ基因整合到集胞藻6803基因组DNA上。逐步提高氨苄青霉素浓度,筛选得到遗传性状稳定的转基因集胞藻6803。PCR检测转基因集胞藻6803，结果证实ββ基因已整合到集胞藻6803的染色体上；Westernblotting结果表明，ββ基因在转基因集胞藻6803细胞中得到表达，ELISA测定表明在50μmol/L的Zn2+诱导下ββ在新鲜集胞藻6803中的蛋白表达量为0.739mg/g；重金属耐受性实验表明，得到能耐受Cu2+的转基因集胞藻6803。经原子吸收光谱法测定,转基因集胞藻6803在含低浓度Cu2+（10μmol/L）的培养液中对Cu2+的去除率可达到82%。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施定基	中国科学院植物研究所	66	1027	18.0	28.0
2	茹炳根	北京大学生命科学学院	102	1233	20.0	29.0
3	俞梅敏	北京大学生命科学学院	20	260	9.0	16.0
4	宁叶	北京大学生命科学学院	8	62	3.0	7.0
5	罗娜	北京大学生命科学学院	4	38	2.0	4.0
6	邵宁	中国科学院植物研究所	4	34	2.0	4.0